新冠血清檢測假陽性！虛驚一場的快速反應(yīng)

“聽說你們醫(yī)院查出2例新型冠狀病毒抗體IgM陽性？”

這是日照心臟病醫(yī)院/青島大學(xué)附屬日照醫(yī)院職工今天接到最多的關(guān)心電話！

確實！！

2020年10月14日下午，日照心臟病醫(yī)院/青島大學(xué)附屬日照醫(yī)院檢驗中心在對核酸檢測受檢者進行新型冠狀病毒核酸檢測時檢測到兩份血清樣本新型冠狀病毒抗體IgM陽性。

畢竟在這個新冠肺炎疫情反復(fù)的重要時期，任何關(guān)于疫情防控的信息都牽動著每一位市民朋友的心！

面對疫情，日照心臟病醫(yī)院/青島大學(xué)附屬日照醫(yī)院沒有絲毫懈怠，嚴(yán)格操作規(guī)范，檢驗中心立即進行復(fù)檢、核對，并同時查看儀器狀態(tài)，試劑狀態(tài)。確認(rèn)在控、復(fù)檢結(jié)果核對后，立即上報。

醫(yī)院高度重視，緊急啟動疫情防控應(yīng)急預(yù)案工作，院感辦在第一時間將相關(guān)信息及時上報至高新區(qū)管委與市疾控中心，市疾控中心迅速反應(yīng)，通知五蓮縣疾控中心與東港區(qū)疾控中心安排兩位受檢者及時進行復(fù)檢。

經(jīng)當(dāng)?shù)丶部刂行膹?fù)查，兩位受檢者肺部CT無影像學(xué)改變，血清IgM、IgG、核酸檢測均呈陰性，判斷兩位受檢者均為“假陽性”.

真誠感謝廣大市民朋友們的關(guān)心和厚愛！感謝為此快速反應(yīng)為民送平安的各級政府相關(guān)部門！

為什么會出現(xiàn)“假陽性”？

特異IgM和IgG免疫測定假陽性通常有以下兩個方面的原因，一是試劑盒陽性判斷值（Cut-off value）的設(shè)定，一些處于陽性判斷值附近的弱陽性結(jié)果，很可能是假陽性；其二是患者標(biāo)本中存在導(dǎo)致免疫測定假陽性的內(nèi)源性或外源性干擾物質(zhì)。

（一）陽性判斷值的設(shè)定

膠體金試紙條檢測是通過肉眼觀察顏色有否來判斷陽性和陰性，不存在陽性判斷值的問題，但會存在不同檢測者判斷的差異?；瘜W(xué)發(fā)光免疫試驗（CLIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）則需要設(shè)定陽性判斷值，其較好的做法是通過測定大量的陰性人群（可數(shù)千份）和一定數(shù)量（可數(shù)百份）的已知陽性人群標(biāo)本，會得到如圖2的一個分布，采用接受機工作特性（Receiver Operating characteristic，ROC）曲線或其他統(tǒng)計學(xué)方法得到的陽性判斷值，通常為假陽性和假陰性均較低且達到平衡狀態(tài)時的測定信號如OD值或發(fā)光值。因此，不可避免處于其周邊陽性一側(cè)的結(jié)果，會有一部分弱陽性其實際為假陽性。

（二）干擾物質(zhì)

1、內(nèi)源性：內(nèi)源性干擾物質(zhì)一般包括類風(fēng)濕因子、嗜異性抗體、補體、因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig 抗體等。在日常的臨床血清（漿）標(biāo)本中，有相當(dāng)比例的標(biāo)本不同程度的含有上述各種干擾物質(zhì)，從而可能導(dǎo)致測定結(jié)果的假陽性。

（1）類風(fēng)濕因子

（Rheumatoid factors，RF）

在類風(fēng)濕患者、其他疾病以及正常人血清中，常含有較高或不同濃度的RF，其通常為IgM型，亦有IgG和IgA型，RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點，因此在免疫測定中，其可與固相上包被的特異抗體IgG以及隨后加入的標(biāo)記的特異抗體IgG結(jié)合，從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。尤其是在捕獲法IgM型特異抗體的測定中表現(xiàn)最為明顯，因為此時固相包被的抗體為抗人μ鏈抗體，IgM型RF的存在可使其大量結(jié)合于固相。

為避免RF的干擾，通?？刹扇∫韵麓胧?）稀釋標(biāo)本。這在判斷急性病原體感染的特異IgM抗體檢測等尤為有用。因為急性感染時，血循環(huán)中特異的IgM抗體滴度通常很高，而RF滴度通常相對要低很多。因此，在測定前對標(biāo)本進行稀釋，特異的IgM因高滴度仍可檢出，而非特異的RF則會因為稀釋變成很低的滴度，從而不影響測定。2）改變酶標(biāo)抗體。由于RF結(jié)合的是IgG的Fc片段，如果將標(biāo)記抗體的Fc片段酶切去除，僅留下具有特異結(jié)合功能的F(ab’)2部分用于標(biāo)記，則在測定中即可避免RF的干擾。3）標(biāo)本中RF用變性IgG預(yù)先封閉。將經(jīng)熱變性（63℃，10 min）的動物如兔、羊等的IgG加入到標(biāo)本稀釋液中。此外，在測定特異IgM時，也可使用抗人IgG去除臨床標(biāo)本中RF和IgG。4）測定時，可在標(biāo)本中加入一定濃度的尿素，其可以解離低親合力結(jié)合的RF和IgG，因而可以去除RF的干擾。

（2）嗜異性抗體

（Heterophilicantibodies）

 人類血清中可能會含有抗嚙齒類動物（如鼠、馬、羊等）的抗體，即天然嗜異性抗體。有研究表明，天然的嗜異性抗體（IgG）可分為兩類，一類（85%的假陽性由其引起）可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域，但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合。另一類（15%的假陽性由其引起）可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的FC區(qū)表位，但不與山羊和大鼠IgG的FC區(qū)表位結(jié)合。嗜異性抗體可通過交聯(lián)固相和標(biāo)記的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。

由嗜異性抗體引起的干擾可通過下述方法避免：

1）使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測定標(biāo)記抗體。

2）在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig，封閉可能存在的嗜異性抗體。但加入量不足或亞類不同時無效。

（3）補體

在固相免疫測定中，來自哺乳動物的固相特異抗體和標(biāo)記二抗均可以激活人補體系統(tǒng)。因為其在固相吸附及結(jié)合過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)， Fc段的補體C1q結(jié)合位點被暴露出來，這樣C1q就成為一個中介物將二者交聯(lián)起來，從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。由補體引起的干擾可采用56℃30 min加熱可使標(biāo)本中的補體C1q滅活。但實施前，一定要有實驗證明這種滅活不會影響特定試劑的檢測結(jié)果。

（4）因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體

在臨床上，有可能使用鼠源性單克隆抗體進行靶向治療，及使用放射性核素標(biāo)記鼠源性單克隆抗體進行影像診斷等，均有可能使相應(yīng)患者體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體。這種抗鼠抗體對使用鼠源性單克隆抗體的免疫測定，可產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

由抗鼠抗體引起的干擾可通過下述方法避免：

1）使用特異的抗體F(ab’)2片段作為固相或測定酶標(biāo)抗體。

2）在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過量的鼠Ig，封閉可能存在的抗鼠抗體。

（5）溶菌酶

溶菌酶可與等電點較低的蛋白有強的結(jié)合能力。免疫球蛋白等電點約為5，因此，在免疫測定中，溶菌酶可在包被的IgG和標(biāo)記的IgG間形成橋接，從而導(dǎo)致假陽性。Cu2+離子和卵白蛋白可有效地封閉溶菌酶，防止其聯(lián)接IgG。

2、外源性：外源性干擾物質(zhì)包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長和標(biāo)本凝固不全等。

（1）標(biāo)本溶血

要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白的血紅素基團有類似過氧化物的活性，因此，在以辣根過氧化物酶（HRP）為標(biāo)記酶的ELISA和CLIA中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其在溫育過程中會吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色或發(fā)光，導(dǎo)致假陽性。

（2）標(biāo)本貯存時間過長

標(biāo)本在2~8℃下保存時間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法免疫測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性。

如何查詢您的核酸檢測報告？

1.關(guān)注“日照心臟病醫(yī)院”公眾號。點擊下方“掌上醫(yī)院”——就診服務(wù)——在線綁卡——檢驗報告即可獲取。

2.持就診卡在自助機上領(lǐng)取。

  醫(yī)院自助機地址：門診樓二樓東側(cè)檢驗中心旁邊。

3.通過支付寶中的健康通行碼下方的‘核酸檢測信息查詢’進行查詢。具體發(fā)布時間以當(dāng)?shù)貦C構(gòu)的發(fā)布時間為準(zhǔn)。

疫情就是命令，

防控就是責(zé)任！

日照心臟病醫(yī)院/青島大學(xué)附屬日照醫(yī)院

將嚴(yán)格遵行疫情防控指令

全力與市民群眾們一起

眾志成城

共同打贏這場疫情防控阻擊戰(zhàn)！